Plasmide CRISPR/Cas9 KO NICE4 (h): sc-411379

Présentation

UBAP2L (NICE4) code une protéine liant l’ARN, associée à l’ubiquitine, qui se localise dans des granules ribonucléoprotéiques cytoplasmiques et contribue au contrôle post‑transcriptionnel de l’expression génique. Elle a été impliquée dans l’assemblage des granules de stress et le métabolisme de l’ARN, soutenant l’adaptation cellulaire au stress protéotoxique et oxydatif tout en influençant les programmes de prolifération et de survie. Par ces fonctions, UBAP2L est reliée à des voies qui régissent la traduction des ARNm et leur stabilité, et sa dérégulation a été rapportée dans des études portant sur la croissance associée au cancer et des phénotypes métastatiques. L’analyse de la fonction de NICE4 peut aider à préciser comment la dynamique des granules d’ARN et la signalisation liée à l’ubiquitine coordonnent des transitions d’état cellulaire pertinentes pour la biologie des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NICE4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UBAP2L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UBAP2L, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UBAP2L à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NICE4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UBAP2L pour l'étude de la signalisation de NICE4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UBAP2L essentiels à la fonction de NICE4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UBAP2L pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NICE4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NICE4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UBAP2L. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NICE4 plasmide HDR (h) et le NICE4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UBAP2L pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UBAP2L définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.