nicastrin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402790-ACT

ヒトNCSTNはニカストリンをコードしており、ニカストリンはI型膜貫通型糖タンパク質としてγセクレターゼ複合体の必須サブユニットを成し、基質認識およびプレセニリンを含むプロテアーゼ複合体の成熟を支えます。γセクレターゼ活性を介して、ニカストリンはNOTCH受容体やアミロイド前駆体タンパク質（APP）など多様な基質の制御された膜内プロテオリシスに関与し、NCSTNをNotchシグナル伝達、細胞運命決定、膜タンパク質のターンオーバーと結び付けています。γセクレターゼ構成因子の攪乱は、分化プログラム、炎症性シグナル、プロテオスタシスを変化させ得るため、NCSTNは神経生物学、上皮恒常性、皮膚生物学に関連する経路における重要な研究対象として広く注目されています。NCSTNの発現異常やバリアントは、Notch経路活性の異常や表皮・免疫応答の変化を伴う疾患と関連付けられており、機能ゲノミクス研究における機序的背景を提供します。

nicastrin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NCSTNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

nicastrin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NCSTN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNCSTN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性nicastrinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNCSTN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるnicastrin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNCSTN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるnicastrin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。