Plasmide Double Nickase (h) NGFR p75: sc-400552-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NGFR p75 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NGFR p75 Double Nickase (h) et le plasmide NGFR p75 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NGFR. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NGFR p75 Antibody (B-1): sc-271708
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NGFR p75 | sc-400552-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NGFR p75 | sc-400552-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NGFR code le récepteur p75 des neurotrophines (NGFR p75), un membre de la superfamille des récepteurs du TNF qui se lie aux neurotrophines et aux pronéurotrophines afin de moduler la survie neuronale, l’apoptose, la croissance des neurites et le remodelage synaptique. NGFR p75 agit comme un hub de signalisation dépendant du contexte via des interactions avec des corécepteurs tels que les récepteurs Trk et la sortiline, en activant notamment les voies NF-κB, JNK/c-Jun, la dynamique du cytosquelette médiée par RhoA et la signalisation par les céramides. Au-delà du système nerveux, NGFR p75 influence la biologie des cellules de Schwann, la régénération axonale et les états cellulaires dérivés de la crête neurale. Une dérégulation de la signalisation et de l’expression de NGFR a été associée à des processus neurodégénératifs, aux réponses aux lésions nerveuses, ainsi qu’à la plasticité et au caractère invasif des cellules tumorales dans plusieurs contextes pertinents en oncologie, ce qui appuie son utilisation dans des études mécanistiques.
NGFR p75 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NGFR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NGFR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NGFR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NGFR.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.