Plasmide CRISPR d'Activation (h) NGFR p75: sc-400552-ACT

NGFR (p75NTR) code le récepteur aux neurotrophines de faible affinité NGFR p75, membre de la superfamille des récepteurs du TNF, qui se lie au NGF et à d’autres neurotrophines afin de moduler, de manière dépendante du contexte, la survie neuronale, la différenciation et l’apoptose. NGFR p75 coopère avec les récepteurs Trk et la sortiline pour influencer la spécificité des ligands et réguler la signalisation en aval via les voies NF-κB, JNK/c-Jun, RhoA et dépendantes des céramides, qui façonnent la croissance axonale, le remodelage synaptique et les réponses au stress. Dans les tissus humains, l’expression de NGFR marque des lignées dérivées de la crête neurale ainsi que des réponses dynamiques aux lésions, et une signalisation p75NTR altérée a été associée à la neurodégénérescence, à des mécanismes de douleur neuropathique et à la plasticité des cellules tumorales dans plusieurs cancers. Ces propriétés font de NGFR un outil moléculaire utile pour explorer les interactions entre voies de signalisation des neurotrophines, les transitions de destinée cellulaire et les seuils de signalisation orientant l’apoptose versus la survie.

NGFR p75 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NGFR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NGFR p75 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NGFR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NGFR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NGFR p75. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NGFR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NGFR p75 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NGFR p75 dans les cellules tumorales présentant une expression de NGFR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.