Plasmide Double Nickase (h) NGAL: sc-401838-NIC

LCN2 code la lipocaline associée à la gélatinase des neutrophiles (NGAL), une lipocaline sécrétée qui se lie au fer associé aux sidérophores et module le trafic du fer, la défense antimicrobienne et les réponses au stress épithélial. NGAL participe à la signalisation de l’immunité innée et au remodelage inflammatoire, en s’inscrivant dans des voies qui contrôlent la chimiotaxie, les réseaux de cytokines et la dynamique de la matrice extracellulaire, via des interactions avec des partenaires tels que MMP9. Dans les tissus humains, une expression altérée de LCN2/NGAL est fréquemment associée à l’inflammation métabolique, aux réponses aux lésions rénales et cardiovasculaires, ainsi qu’à la communication tumeur–stroma, ce qui en fait un marqueur utile des programmes d’adaptation au stress. Ces caractéristiques soutiennent des études mécanistiques du stress oxydatif dépendant du fer, du dialogue épithélio‑immunitaire et de la régulation du microenvironnement.

NGAL Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LCN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LCN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LCN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LCN2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.