Plasmide CRISPR d'Activation (h) NGAL: sc-401838-ACT

LCN2 code la lipocaline associée à la gélatinase des neutrophiles (NGAL), une lipocaline sécrétée qui se lie aux complexes sidérophore–fer et module le trafic du fer, la défense antimicrobienne et les réponses au stress épithélial. NGAL participe à la signalisation de l’immunité innée et aux programmes inflammatoires, notamment via des interactions avec les voies dépendantes de NF-κB et des cytokines, et elle est fréquemment induite lors de lésions tissulaires et de stress cellulaire. En biologie humaine, une expression altérée de LCN2/NGAL a été associée à une inflammation dérégulée, à un remodelage métabolique et à des modifications du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud mécanistique pour l’étude des interactions immunité–épithélium. Ses rôles dans la dynamique de la matrice extracellulaire et dans des processus associés aux protéases relient en outre NGAL à des contextes tels que la dysfonction de barrière et les phénotypes de remodelage.

NGAL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LCN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NGAL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LCN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LCN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NGAL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LCN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NGAL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NGAL dans les cellules tumorales présentant une expression de LCN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.