Plasmide Double Nickase (h) NFS1: sc-403102-NIC

NFS1 code une désulfurase de la cystéine qui initie la biogenèse de novo des centres fer–soufre (Fe–S) dans les mitochondries en mobilisant le soufre à partir de la L‑cystéine et en le transférant à la machinerie d’assemblage ISC. Par cette voie, NFS1 soutient la maturation des enzymes dépendantes des centres Fe–S impliquées dans la phosphorylation oxydative, le métabolisme de l’acide lipoïque et le maintien de l’intégrité des génomes mitochondrial et nucléaire. Une perturbation de NFS1 peut altérer la respiration mitochondriale et l’homéostasie rédox, avec des effets en aval sur la prolifération cellulaire et les réponses au stress. Des études génétiques et fonctionnelles relient une altération de l’assemblage des centres Fe–S à des phénotypes de maladies mitochondriales multisystémiques, faisant de NFS1 une cible clé pour des investigations mécanistiques de la vulnérabilité métabolique et du maintien du génome.

NFS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NFS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NFS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NFS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NFS1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.