NFKBIA/IkB alpha Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400034-LAC

NFKBIA codifica IκBα, un importante regolatore inibitorio della segnalazione di NF-κB che si lega ai complessi RELA/p50 nel citoplasma e ne limita la traslocazione nel nucleo. In seguito all’attivazione del complesso IKK indotta da infiammazione o stress, IκBα viene fosforilata, ubiquitinata e degradata, consentendo la rapida trascrizione dei geni bersaglio di NF-κB coinvolti nella produzione di citochine, nell’immunità innata, nell’apoptosi e nella sopravvivenza cellulare. NFKBIA è anche un bersaglio trascrizionale diretto di NF-κB, formando un circuito di feedback negativo che modula ampiezza e durata del segnale. Un controllo disfunzionale di IκBα è implicato nell’infiammazione cronica e nell’attività oncogenica di NF-κB, rendendo NFKBIA un nodo frequentemente studiato nella segnalazione immunitaria, nella biologia dei tumori e nella regolazione del destino cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale NFKBIA/IkB alpha (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NFKBIA in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale NFKBIA/IkB alpha (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NFKBIA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di NFKBIA/IkB alpha. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NFKBIA e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.