Particules Lentivirales d'Activation (h) NFKBIA/IkB alpha: sc-400034-LAC

NFKBIA code pour IκBα, un régulateur inhibiteur clé de la signalisation NF-κB, qui se lie aux complexes RELA/p50 dans le cytoplasme et limite leur translocation vers le noyau. Lors d’une activation du complexe IKK induite par l’inflammation ou le stress, IκBα est phosphorylée, ubiquitinylée puis dégradée, ce qui permet une transcription rapide des gènes cibles de NF-κB impliqués dans la production de cytokines, l’immunité innée, l’apoptose et la survie cellulaire. NFKBIA est aussi une cible transcriptionnelle directe de NF-κB, formant une boucle de rétrocontrôle négatif qui module l’amplitude et la durée du signal. Un contrôle dérégulé d’IκBα est impliqué dans l’inflammation chronique et l’activité oncogénique de NF-κB, faisant de NFKBIA un nœud fréquemment étudié en signalisation immunitaire, biologie des tumeurs et régulation du destin cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales NFKBIA/IkB alpha (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NFKBIA dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NFKBIA/IkB alpha (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NFKBIA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NFKBIA/IkB alpha. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NFKBIA ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.