Plasmide CRISPR/Cas9 KO NFKBIA/IkB alpha (m): sc-421878

Présentation

Nfkbia code l’inhibiteur alpha de NF-κB (IκBα), un régulateur négatif majeur de la voie canonique de signalisation NF-κB, qui se lie aux complexes RelA/p50 et les retient dans le cytoplasme en conditions basales. Lors d’une stimulation par des cytokines pro-inflammatoires, des ligands des récepteurs de type Toll (TLR) ou la signalisation du récepteur de l’antigène, IκBα est phosphorylée par le complexe IKK puis dégradée, permettant la translocation nucléaire de NF-κB et la transcription de gènes impliqués dans l’immunité, la réponse au stress et la survie cellulaire. Ce circuit de rétrocontrôle module l’activation de l’immunité innée et adaptative, la production de cytokines et les décisions de destinée cellulaire, et sert largement de point d’entrée mécanistique pour étudier le remodelage tissulaire induit par l’inflammation et la signalisation oncogénique. Dans les systèmes murins, la perturbation de NFKBIA est couramment utilisée pour disséquer les interactions entre voies (cross-talk) avec les programmes MAPK, interféron et apoptotiques, dans des modèles de dérégulation immunitaire et de signalisation du microenvironnement tumoral.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NFKBIA/IkB alpha (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nfkbia dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nfkbia, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nfkbia à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NFKBIA/IkB alpha.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nfkbia pour l'étude de la signalisation de NFKBIA/IkB alpha, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nfkbia essentiels à la fonction de NFKBIA/IkB alpha
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nfkbia pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NFKBIA/IkB alpha plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NFKBIA/IkB alpha plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nfkbia. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NFKBIA/IkB alpha plasmide HDR (m) et le NFKBIA/IkB alpha (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nfkbia pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nfkbia définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.