NFATc2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400422

Übersicht

NFATC2 kodiert NFATc2, einen durch Calcium/Calcineurin regulierten Transkriptionsfaktor, der Genexpressionsprogramme nachgeschaltet an die Signalübertragung des T‑Zell-Rezeptors und anderer Immunrezeptorwege koordiniert. Nach der Dephosphorylierung transloziert NFATc2 in den Zellkern und wirkt mit AP‑1 und weiteren Kofaktoren zusammen, um die Zytokinproduktion, die aktivierungsinduzierte Differenzierung und die Immuntoleranz zu regulieren. Die Aktivität von NFATc2 integriert Ca²⁺-Signale mit Crosstalk zu MAPK- und NF‑κB-Signalwegen und prägt so die Proliferation von Lymphozyten sowie deren Effektor-Funktion. Eine Fehlregulation der NFATC2-Signalisierung wurde mit entzündlichen und autoimmunen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird außerdem im Hinblick auf Tumor‑Immun-Interaktionen sowie abweichende Transkriptionszustände in der Krebsbiologie untersucht.

Das NFATc2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NFATC2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NFATC2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NFATC2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NFATc2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NFATC2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NFATc2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NFATC2-Exone abzielen, die für die NFATc2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NFATC2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NFATc2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NFATc2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NFATC2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NFATc2 HDR-Plasmid (h) und NFATc2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NFATC2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NFATC2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.