Plasmide CRISPR/Cas9 KO NFATc1 (h): sc-400164

Présentation

NFATC1 code pour NFATc1, un facteur de transcription régulé par le calcium/la calcineurine qui se transloque dans le noyau à la suite de la signalisation du récepteur des lymphocytes T afin d’orchestrer des programmes d’activation immunitaire. NFATc1 intègre une signalisation dépendante du Ca2+ avec des entrées MAPK et AP-1 pour contrôler la transcription de cytokines, de molécules co-stimulatrices et de gènes associés à la différenciation dans les lymphocytes. Au-delà de l’immunité, NFATc1 contribue à l’ostéoclastogenèse et aux décisions de destinée cellulaire via un dialogue (crosstalk) avec RANKL, NF-κB et d’autres réseaux transcriptionnels. Une activité dérégulée de NFATc1 a été associée à des processus inflammatoires pathologiques et à des états transcriptionnels aberrants observés dans de multiples contextes liés au cancer, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques du couplage entre signalisation et transcription.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NFATc1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NFATC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NFATC1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NFATC1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NFATc1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NFATC1 pour l'étude de la signalisation de NFATc1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NFATC1 essentiels à la fonction de NFATc1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NFATC1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NFATc1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NFATc1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NFATC1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NFATc1 plasmide HDR (h) et le NFATc1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NFATC1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NFATC1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.