NFAT5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401359-ACT

NFAT5 (fator nuclear de células T ativadas 5), também conhecido como proteína de ligação ao potenciador responsivo à tonicidade, é um fator de transcrição da família Rel que coordena programas gênicos de osmo-adaptação em células humanas. Ele regula a expressão de transportadores, chaperonas e enzimas metabólicas que mantêm o equilíbrio iônico e a proteostase sob estresse hipertônico, integrando sinais das vias p38/MAPK, JNK e dependentes de cálcio. A atividade do NFAT5 influencia a sobrevivência, a proliferação e a diferenciação celular em contextos imunológicos, da medula renal e epiteliais, e sua desregulação tem sido associada à sinalização inflamatória, às respostas de estresse tecidual e à adaptação de células tumorais a microambientes adversos. Como mediador central da transcrição responsiva à tonicidade e ao estresse, o NFAT5 é amplamente estudado por seus papéis na regulação de citocinas, na função de barreira e em mecanismos de resiliência celular.

NFAT5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NFAT5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NFAT5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NFAT5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NFAT5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NFAT5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NFAT5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NFAT5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NFAT5 em células tumorais com expressão de NFAT5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.