Plásmido CRISPR de Activación (h) NFAT5: sc-401359-ACT

NFAT5 (factor nuclear de células T activadas 5), también conocido como proteína de unión al potenciador sensible a la tonicidad, es un factor de transcripción de la familia Rel que coordina programas génicos de osmoadaptación en células humanas. Regula la expresión de transportadores, chaperonas y enzimas metabólicas que mantienen el equilibrio iónico y la proteostasis bajo estrés hipertónico, integrando señales de las vías p38/MAPK, JNK y dependientes de calcio. La actividad de NFAT5 influye en la supervivencia, proliferación y diferenciación celular en contextos inmunitarios, de la médula renal y epiteliales, y su desregulación se ha asociado con señalización inflamatoria, respuestas tisulares al estrés y la adaptación de células tumorales a microambientes adversos. Como mediador central de la transcripción sensible a la tonicidad y al estrés, NFAT5 se estudia ampliamente por sus funciones en la regulación de citocinas, la función de barrera y los mecanismos de resiliencia celular.

NFAT5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NFAT5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NFAT5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NFAT5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NFAT5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NFAT5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NFAT5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NFAT5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NFAT5 en células tumorales con expresión de NFAT5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.