NF90 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402626-ACT

ILF3 kodiert NF90, ein multifunktionales doppelsträngiges RNA-bindendes Protein, das die Genexpression auf transkriptioneller und posttranskriptioneller Ebene reguliert, indem es die Stabilität, das Spleißen, den Transport und die Translation von mRNA kontrolliert. NF90 ist an der RNA-Prozessierung und an stressabhängigen Programmen beteiligt, einschließlich antiviraler Signalwege und der Regulation entzündungsrelevanter Gene, und kann über Interaktionen mit der Transkriptionsmaschinerie und dem RNA-Reifungsapparat den Zellzyklusverlauf modulieren. Über diese Funktionen beeinflusst ILF3/NF90 Signalwege wie die Expression interferon-stimulierter Gene, die RNA-Überwachung und den Aufbau von Ribonukleoprotein-Komplexen. Eine fehlregulierte NF90-Aktivität und veränderte ILF3-Expression wurden in Zusammenhängen beschrieben, die für die Krebsbiologie, immunvermittelte Entzündungen und Virusinfektionen relevant sind, was seinen Einsatz als mechanistischer Knotenpunkt in Studien zur Genregulation stützt.

NF90 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ILF3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NF90 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ILF3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ILF3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NF90-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ILF3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NF90-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NF90-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ILF3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.