Plásmido CRISPR de Activación (h) NF90: sc-402626-ACT

ILF3 codifica NF90, una proteína multifuncional de unión a ARN de doble cadena que regula la expresión génica a nivel transcripcional y postranscripcional mediante el control de la estabilidad del ARNm, el empalme (splicing), el transporte y la traducción. NF90 participa en el procesamiento de ARN y en programas de respuesta al estrés, incluidas la señalización antiviral y la regulación de genes inflamatorios, y puede modular la progresión del ciclo celular a través de interacciones con la maquinaria de transcripción y de maduración del ARN. A través de estas funciones, ILF3/NF90 influye en vías como la expresión de genes estimulados por interferón, la vigilancia del ARN y el ensamblaje de complejos ribonucleoproteicos. Se ha descrito actividad desregulada de NF90 y expresión alterada de ILF3 en contextos relevantes para la biología del cáncer, la inflamación mediada por el sistema inmunitario y la infección viral, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de regulación génica.

NF90 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ILF3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NF90 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ILF3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ILF3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NF90. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ILF3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NF90 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NF90 en células tumorales con expresión de ILF3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.