Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
NF-L Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402254
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- NF-L El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico NF-L, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NF-L Anticuerpo (8A1): sc-20012
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
NF-L Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402254 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
NEFL codifica la cadena ligera de neurofilamento (NF-L), una proteína central de filamento intermedio que se ensambla con NEFM y NEFH para formar el citoesqueleto neuronal y mantener el calibre axonal y la estabilidad mecánica. NF-L participa en el transporte y la organización de los neurofilamentos, influyendo en el tráfico axonal, la dinámica del citoesqueleto y la conectividad neuronal de largo alcance. La alteración de la función de NEFL perturba el ensamblaje de los neurofilamentos y la integridad del axón, vinculando las vías de estrés del citoesqueleto con una disfunción neuronal progresiva. Las variantes y la homeostasis alterada de NF-L se asocian con neuropatías hereditarias y procesos neurodegenerativos en los que la estructura y el transporte axonal están comprometidos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO NF-L (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NEFL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NEFL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NEFL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NF-L.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NEFL para la investigación de la señalización de NF-L, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de NEFL críticos para la función de NF-L
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NEFL para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido NF-L CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NF-L CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NEFL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NF-L (h) y el plásmido HDR NF-L (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NEFL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NEFL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.