Plasmide CRISPR/Cas9 KO NFκB p50 (m): sc-421876
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- NFκB p50 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique NFκB p50, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: p-NFκB p50 Antibody (A-8): sc-271908
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO NFκB p50 (m) | sc-421876 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Nfkb1 code pour NFκB p50, un composant central de liaison à l’ADN de la famille des facteurs de transcription NF‑κB, généré par maturation du précurseur p105. NFκB p50 participe à la signalisation canonique NF‑κB en aval de récepteurs tels que TNFR, IL‑1R et les récepteurs de type Toll (TLR), afin de réguler l’expression de gènes inflammatoires, les réponses immunitaires innées et adaptatives, la survie cellulaire et la signalisation du stress. Selon la composition des dimères, les complexes contenant p50 peuvent activer la transcription (p. ex. avec RelA/p65) ou la réprimer (p. ex. les homodimères p50), modulant ainsi les programmes de cytokines ainsi que la fonction des macrophages et des lymphocytes. La dérégulation des voies dépendantes de Nfkb1 est largement utilisée comme lien mécanistique dans des modèles murins d’inflammation chronique, d’auto-immunité, d’infection et de microenvironnements inflammatoires pro-tumoraux.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NFκB p50 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nfkb1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nfkb1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nfkb1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NFκB p50.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nfkb1 pour l'étude de la signalisation de NFκB p50, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Nfkb1 essentiels à la fonction de NFκB p50
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nfkb1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le NFκB p50 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NFκB p50 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nfkb1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le NFκB p50 plasmide HDR (m) et le NFκB p50 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nfkb1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nfkb1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.