Plasmide CRISPR/Cas9 KO NF-1X (m): sc-421875

Présentation

Nfix code le facteur nucléaire I de type X (NF‑1X), un facteur de transcription se liant à l’ADN de manière spécifique à une séquence, qui reconnaît les éléments consensus NFI afin de réguler l’activité des promoteurs et des enhancers au cours du développement. Chez la souris, NF‑1X contribue aux programmes de spécification de lignée et de maturation dans le système nerveux et le muscle squelettique, en influençant la sortie du cycle cellulaire, la différenciation et l’expression de gènes associés à la matrice extracellulaire. Les facteurs de la famille NF‑1 interagissent avec le remodelage de la chromatine et des réseaux de co‑régulateurs transcriptionnels pour coordonner le calendrier du développement et l’architecture tissulaire. Un dérèglement de la fonction de NFIX a été associé à des syndromes du développement ainsi qu’à des phénotypes de croissance et de différenciation altérés, ce qui fait de Nfix un nœud utile pour l’étude des circuits de régulation génique pertinents pour le neurodéveloppement et la myogenèse.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NF-1X (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nfix dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nfix, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nfix à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NF-1X.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nfix pour l'étude de la signalisation de NF-1X, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nfix essentiels à la fonction de NF-1X
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nfix pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NF-1X plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NF-1X plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nfix. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NF-1X plasmide HDR (m) et le NF-1X (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nfix pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nfix définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.