Plasmide Double Nickase (h) Neutrophil Elastase: sc-400677-NIC

ELANE code pour l’élastase neutrophile, une protéase à sérine stockée dans les granules azurophiles et libérée lors de la dégranulation et de la formation de pièges extracellulaires des neutrophiles (NET) afin de remodeler la matrice extracellulaire et de dégrader des protéines microbiennes. L’activité de l’élastase neutrophile s’inscrit à l’interface de la signalisation de l’immunité innée, de l’équilibre protéase–antiprotéase et de la protéolyse inflammatoire, influençant la chimiotaxie, la maturation des cytokines et les réponses tissulaires aux lésions. Une fonction ou une expression dérégulée d’ELANE est associée à des pathologies inflammatoires dépendantes des neutrophiles et à une défense de l’hôte altérée, et des variants d’ELANE sont liés à des phénotypes de neutropénie congénitale. En conséquence, ELANE est largement étudié dans la différenciation myéloïde, la biogenèse des granules et les mécanismes qui couplent l’activation des neutrophiles à des microenvironnements protéolytiques.

Neutrophil Elastase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ELANE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ELANE. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ELANE. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ELANE.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.