Plásmido Doble Nickase (h) Neutrophil Elastase: sc-400677-NIC

ELANE codifica la elastasa de neutrófilos, una proteasa de serina almacenada en gránulos azurófilos que se libera durante la desgranulación y la formación de trampas extracelulares de neutrófilos para remodelar la matriz extracelular y degradar proteínas microbianas. La actividad de la elastasa de neutrófilos se entrecruza con la señalización inmunitaria innata, el equilibrio proteasa–antiproteasa y la proteólisis inflamatoria, influyendo en la quimiotaxis, el procesamiento de citocinas y las respuestas de lesión tisular. La función o expresión desregulada de ELANE se asocia con patología inflamatoria impulsada por neutrófilos y con una defensa del huésped deteriorada, y las variantes de ELANE se vinculan a fenotipos de neutropenia congénita. En consecuencia, ELANE se estudia ampliamente en la diferenciación mieloide, la biogénesis de gránulos y los mecanismos que acoplan la activación de los neutrófilos a microambientes proteolíticos.

Neutrophil Elastase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ELANE en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ELANE. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ELANE. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ELANE alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.