Plasmide CRISPR d'Activation (h) Neurotensin: sc-401958-ACT

La neurotensine (NTS) code un neuropeptide sécrété qui transmet des signaux via les récepteurs de la neurotensine afin de moduler la neurotransmission, la sécrétion neuroendocrine, la motricité gastro-intestinale et le traitement nociceptif. Dans les tissus humains, la signalisation des GPCR induite par la neurotensine influence des cascades de seconds messagers, notamment PLC/PKC, MAPK/ERK et PI3K/AKT, reliant la libération du peptide à des changements de l’excitabilité cellulaire et des programmes transcriptionnels. L’expression de NTS est régulée par l’activité neuronale et des signaux métaboliques, et une altération de la signalisation de la neurotensine a été associée, dans plusieurs systèmes modèles, à une dérégulation des voies dopaminergiques, à des signalisations liées à l’inflammation et à des états cellulaires associés aux tumeurs. Ces caractéristiques font de NTS un nœud utile pour étudier la communication médiée par des peptides, la désensibilisation des récepteurs et le remaniement des voies en aval dans des contextes pertinents pour les maladies.

Neurotensin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NTS sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Neurotensin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NTS dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NTS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Neurotensin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NTS natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Neurotensin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Neurotensin dans les cellules tumorales présentant une expression de NTS silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.