neuroserpin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406912

Übersicht

SERPINI1 kodiert Neuroserpin, einen sezernierten Serinprotease-Inhibitor (Serpin), der die extrazelluläre Proteolyse reguliert, vor allem durch die Hemmung des gewebetypischen Plasminogenaktivators (tPA). Durch die Modulation der Plasminogen-Aktivierungskaskade beeinflusst Neuroserpin das perizelluläre Matrix-Remodeling, die synaptische Plastizität sowie proteasegetriebene Signalwege im Nervensystem. SERPINI1 wird in Neuronen stark exprimiert und ist aufgrund der Neigung zur Fehlfaltung bei pathogenen Varianten mit Protein-Konformationsstabilität und ER-Qualitätskontrollwegen verknüpft. Eine Dysregulation von Neuroserpin wurde mit neurodegenerativen Phänotypen und einer erhöhten neuronalen Vulnerabilität in Zusammenhang gebracht, insbesondere dort, wo Proteasegleichgewicht und Proteostase entscheidend sind.

Das neuroserpin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SERPINI1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SERPINI1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SERPINI1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die neuroserpin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SERPINI1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der neuroserpin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SERPINI1-Exone abzielen, die für die neuroserpin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SERPINI1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom neuroserpin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom neuroserpin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SERPINI1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das neuroserpin HDR-Plasmid (h) und neuroserpin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SERPINI1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SERPINI1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.