Neuroplastin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422859

Descripción general

El gen Nptn del ratón codifica la neuroplastina, una proteína de adhesión celular glucosilada de la superfamilia de las inmunoglobulinas, enriquecida en las sinapsis y en otros compartimentos de membrana, donde favorece el crecimiento de neuritas, la organización sináptica y la plasticidad dependiente de la actividad. La neuroplastina también actúa como una subunidad auxiliar esencial de las ATPasas de Ca²⁺ de la membrana plasmática (PMCA), vinculando Nptn con la homeostasis del calcio intracelular y con la señalización regulada por Ca²⁺ que modela la excitabilidad y la expresión génica. A través de estas funciones, Nptn contribuye al desarrollo de circuitos y a procesos de remodelación sináptica relevantes para fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como para alteraciones más amplias derivadas de un manejo del calcio desregulado. Su localización en membrana y su red de interacciones lo convierten en un nodo útil para estudiar la señalización dependiente de la adhesión, la maduración de las sinapsis y las vías dependientes de calcio en modelos neuronales y gliales de ratón.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Neuroplastin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nptn en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nptn junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nptn tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Neuroplastin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nptn para la investigación de la señalización de Neuroplastin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nptn críticos para la función de Neuroplastin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nptn para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Neuroplastin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Neuroplastin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nptn. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Neuroplastin (m) y el plásmido HDR Neuroplastin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nptn para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nptn definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.