Neuroplastin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404244-ACT

O NPTN humano codifica a neuroplastina, uma glicoproteína de adesão celular da superfamília das imunoglobulinas, enriquecida nas sinapses neuronais e também expressa em diversos tecidos não neurais. A neuroplastina participa da formação e estabilização de sinapses, regula a neurotransmissão excitatória e a plasticidade sináptica, e se relaciona com a homeostase de Ca²⁺ por meio do acoplamento funcional às ATPases de Ca²⁺ da membrana plasmática, influenciando a sinalização downstream dependente de cálcio. Essas atividades conectam o NPTN a vias que governam o crescimento de neuritos, a remodelação de circuitos dependente de atividade e a organização de proteínas de membrana. Alterações na expressão ou na sinalização da neuroplastina têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, e ela é frequentemente estudada no contexto de disfunção sináptica relacionada à cognição e de remodelação do estado celular em modelos de doença.

Neuroplastin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NPTN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neuroplastin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NPTN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NPTN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neuroplastin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NPTN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neuroplastin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neuroplastin em células tumorais com expressão de NPTN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.