Plasmide CRISPR/Cas9 KO neuropilin-2 (m): sc-421965

Présentation

Le gène murin **Nrp2** code la neuropiline-2, un co‑récepteur multifonctionnel qui module la signalisation des sémaphorines de classe 3 et de la famille du VEGF afin de réguler le guidage axonal, l’organisation des réseaux endothéliaux et lymphatiques, ainsi que le trafic des cellules immunitaires. La neuropiline-2 participe à des processus tels que la migration cellulaire dirigée, le remodelage du cytosquelette et la signalisation des récepteurs tyrosine kinases, en influençant des voies liées à l’angiogenèse et à la lymphangiogenèse. Dans divers contextes tissulaires, une activité altérée de **Nrp2** est associée à des modifications du câblage neurodéveloppemental, de la perméabilité vasculaire et du recrutement des cellules inflammatoires. Ces fonctions font de **Nrp2** un nœud couramment utilisé pour étudier, dans des modèles murins, la signalisation dépendante du microenvironnement et la communication cellule‑cellule.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO neuropilin-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nrp2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nrp2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nrp2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine neuropilin-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nrp2 pour l'étude de la signalisation de neuropilin-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nrp2 essentiels à la fonction de neuropilin-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nrp2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le neuropilin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le neuropilin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nrp2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le neuropilin-2 plasmide HDR (m) et le neuropilin-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nrp2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nrp2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.