Plasmide Double Nickase (h) neuropilin-1: sc-400428-NIC

NRP1 code la neuropiline‑1, un corécepteur transmembranaire multifonctionnel qui module la signalisation des sémaphorines de classe 3 et de multiples facteurs de croissance, notamment des ligands de la famille du VEGF, afin de réguler le guidage axonal, l’angiogenèse et la migration des cellules endothéliales. La neuropiline‑1 participe à des voies contrôlant la dynamique du cytosquelette, l’adhérence cellulaire et l’organisation du réseau vasculaire, avec des effets dépendants du contexte sur le développement neuronal et le trafic des cellules immunitaires. Une expression ou une signalisation de NRP1 dérégulée a été associée à un remodelage vasculaire altéré, à des microenvironnements inflammatoires et à des programmes angiogéniques liés aux tumeurs, ce qui en fait une cible fréquemment utilisée dans les études mécanistiques de la signalisation du microenvironnement. In vitro, la perturbation de NRP1 est couramment étudiée dans des modèles de cellules endothéliales, neuronales et cancéreuses afin de cartographier les complexes récepteur‑ligand dépendants du ligand et la reconfiguration des voies en aval.

neuropilin-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NRP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NRP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NRP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NRP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.