neuroligin 3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404537-ACT

NLGN3 codifica a neuroligina 3, uma molécula de adesão celular pós-sináptica que organiza o desenvolvimento e a maturação das sinapses por meio de interações transsinápticas com neurexinas pré-sinápticas. A neuroligina 3 contribui para o equilíbrio entre sinapses excitatórias e inibitórias ao favorecer a montagem e a estabilização de complexos proteicos sinápticos e de plataformas (scaffolds) de receptores de neurotransmissores, influenciando a plasticidade sináptica e a atividade das redes neurais. Alterações na expressão ou na função de NLGN3 têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, em concordância com seus papéis na formação de circuitos, na regulação de espinhas dendríticas e na remodelação de sinapses dependente de atividade.

neuroligin 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NLGN3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

neuroligin 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NLGN3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NLGN3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de neuroligin 3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NLGN3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de neuroligin 3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via neuroligin 3 em células tumorais com expressão de NLGN3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.