neuroligin 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402250-ACT

Das humane Gen **NLGN2** kodiert **Neuroligin 2**, ein postsynaptisches Zelladhäsionsprotein, das an inhibitorischen Synapsen angereichert ist und dort die Synapsenspezifikation, -reifung und Neurotransmission koordiniert, indem es an Neurexine sowie an Gerüstprotein-Komplexe wie **Gephyrin** koppelt. Über diese Interaktionen beeinflusst Neuroligin 2 die Assemblierung GABAerger Synapsen, die Rezeptor-Clusterbildung und das Erregungs-Hemmungs-Gleichgewicht und prägt dadurch Netzwerksynchronie und Plastizität. Eine Fehlregulation der NLGN2-Expression oder der synaptischen Lokalisation wurde mit veränderter Funktion inhibitorischer Schaltkreise in Verbindung gebracht, die an neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen beteiligt ist, darunter Autismus-Spektrum-Störung, Schizophrenie und angstbezogene Verhaltensweisen. Als synaptischer Organisator wird NLGN2 häufig in Signalwegen untersucht, die die Konnektivität von Interneuronen, die Stabilität inhibitorischer Synapsen und aktivitätsabhängiges Remodeling steuern.

neuroligin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NLGN2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

neuroligin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NLGN2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NLGN2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen neuroligin 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NLGN2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von neuroligin 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des neuroligin 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NLGN2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.