Plasmide CRISPR d'Activation (h) Neurogenin 2: sc-401250-ACT

NEUROG2 code la neurogénine 2, un facteur de transcription bHLH (basic helix–loop–helix) qui agit comme déterminant proneural au cours du développement neurologique humain. Elle favorise l’engagement de la lignée neuronale et la différenciation en coordonnant des programmes d’expression génique liés à la neurogenèse, à la sortie du cycle cellulaire et à la maturation des phénotypes neuronaux excitateurs. La neurogénine 2 intègre des signaux développementaux en amont et stimule des réseaux transcriptionnels qui façonnent la spécification des neurones corticaux et spinaux ainsi que la croissance des neurites. Une dérégulation des programmes associés à NEUROG2 est pertinente pour l’étude des dysfonctionnements neurodéveloppementaux, de la reprogrammation neuronale et de la plasticité de lignée dans des modèles de maladies neurologiques.

Neurogenin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NEUROG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Neurogenin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NEUROG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NEUROG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Neurogenin 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NEUROG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Neurogenin 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Neurogenin 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NEUROG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.