Plasmide CRISPR d'Activation (m) Neurogenin 1: sc-421860-ACT

Neurog1 code pour la neurogénine 1, un facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH) qui agit comme un régulateur maître de la neurogenèse dans le système nerveux de la souris. Il favorise l’engagement dans la lignée neuronale et la différenciation en activant des programmes transcriptionnels pro-neuronaux et en coordonnant la sortie du cycle cellulaire, en interaction avec des réseaux de signalisation du développement tels que l’inhibition latérale médiée par Notch/Delta et les cascades de facteurs bHLH neurogéniques. L’activité de la neurogénine 1 contribue au développement des neurones sensoriels ainsi qu’au patronage neuronal du cortex et de la moelle épinière, et la dérégulation des programmes de différenciation neurogénique est pertinente pour l’étude des troubles neurodéveloppementaux congénitaux, des défauts de patronage du tube neural et d’une spécification aberrante du destin neuronal. Parce qu’il se situe en amont de nombreux marqueurs de sous-types neuronaux et d’effecteurs de différenciation, Neurog1 est largement utilisé pour explorer le contrôle transcriptionnel des dynamiques des cellules souches/progénitrices neurales et de la maturation neuronale.

Neurogenin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Neurog1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Neurogenin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Neurog1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Neurog1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Neurogenin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Neurog1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Neurogenin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Neurogenin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Neurog1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.