Plasmide Double Nickase (h) Neurofibromin: sc-400625-NIC

NF1 code la neurofibromine, un grand suppresseur de tumeur cytoplasmique qui agit principalement comme une protéine activatrice de l’activité GTPase de Ras (Ras-GAP), convertissant Ras-GTP actif en Ras-GDP afin de freiner les voies de signalisation MAPK/ERK et PI3K-AKT en aval. Par cette régulation négative, la neurofibromine influence la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la survie, et contribue au contrôle homéostatique de la signalisation des facteurs de croissance. Les altérations perte de fonction de NF1 perturbent la régulation de la voie Ras et sont fortement associées à la neurofibromatose de type 1 ainsi qu’à des processus oncogéniques dépendants de Ras dans de multiples contextes tissulaires. La perturbation de NF1 est donc largement utilisée pour étudier la transduction du signal, la plasticité cellulaire et les relations génotype–phénotype dans des modèles pertinents pour la maladie.

Neurofibromin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NF1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.