Plasmide Double Nickase (m) Neurofibromin 2/NF2/Merlin: sc-421862-NIC

Le gène murin **Nf2** code la neurofibromine 2 (Merlin), une protéine d’échafaudage membrane–cytosquelette qui intègre les signaux issus des jonctions cellule–cellule afin de freiner la prolifération et de maintenir l’architecture épithéliale. Merlin coordonne l’inhibition de contact et la mécanotransduction en reliant l’actine corticale à des voies de régulation de la croissance, notamment la signalisation Hippo et les programmes transcriptionnels en aval de YAP/TAZ. Par ces interactions, NF2 module le trafic des récepteurs et la dynamique du cytosquelette, qui influencent la migration, la polarité et le contrôle du cycle cellulaire. La dérégulation des réseaux associés à NF2 est largement pertinente pour l’étude de l’homéostasie tissulaire et des mécanismes suppresseurs de tumeurs dans les lignages du système nerveux et mésenchymateux.

Neurofibromin 2/NF2/Merlin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nf2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nf2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nf2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nf2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.