Plasmide CRISPR/Cas9 KO neurexin III (h): sc-406719

Présentation

NRXN3 code la neurexine III, une molécule d’adhésion cellulaire présynaptique qui organise la formation et le maintien des synapses en se liant à des partenaires postsynaptiques tels que les neuroligines et d’autres échafaudages synaptiques. Grâce à ces interactions trans-synaptiques, la neurexine III contribue à réguler la probabilité de libération des neurotransmetteurs, la spécification synaptique et le remodelage dépendant de l’activité qui façonnent la fonction des circuits neuronaux. NRXN3 participe à des voies qui gouvernent l’exocytose des vésicules synaptiques, la signalisation dépendante du calcium et l’équilibre excitation/inhibition au sein de réseaux en développement comme matures. Des variations génétiques et des modifications de l’expression de NRXN3 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques de la connectivité synaptique et des dysfonctionnements à l’échelle des circuits.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO neurexin III (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NRXN3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NRXN3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NRXN3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine neurexin III.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NRXN3 pour l'étude de la signalisation de neurexin III, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NRXN3 essentiels à la fonction de neurexin III
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NRXN3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le neurexin III plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le neurexin III plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NRXN3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le neurexin III plasmide HDR (h) et le neurexin III (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NRXN3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NRXN3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.