Neuregulin-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404043-ACT

NRG2 kodiert Neuregulin-2, ein Mitglied der EGF-ähnlichen Neuregulin-Familie, das als Ligand für ERBB-Rezeptor-Tyrosinkinasen fungiert. Über die Signalwege ERBB2/ERBB3 und ERBB4 moduliert Neuregulin-2 die neuronale und gliale Kommunikation, die Synapsenentwicklung sowie aktivitätsabhängige Plastizität und beeinflusst zugleich die PI3K–AKT- und MAPK-Signalwege, die Überleben und Differenzierung regulieren. Die NRG2-Expression und die Dynamik der ERBB-Signalwege wurden mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht; veränderte Neuregulin–ERBB-Signalübertragung wird im Kontext von Schaltkreis-Dysfunktionen und synaptischem Ungleichgewicht untersucht. Diese Eigenschaften machen NRG2 zu einem nützlichen Ziel, um Rezeptor-Ligand-Signalgebung, transkriptionelle Netzwerke und zelltypspezifische Antworten in humanen Zellmodellen zu analysieren.

Neuregulin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NRG2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Neuregulin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NRG2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NRG2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Neuregulin-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NRG2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Neuregulin-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Neuregulin-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NRG2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.