Plasmide CRISPR d'Activation (h) Neurabin-II: sc-403741-ACT

PPP1R9B code la neurabine‑II, une protéine d’échafaudage se liant à la F‑actine, enrichie dans le cerveau, qui cible la protéine phosphatase 1 (PP1) vers des complexes de signalisation cytosquelettiques et synaptiques. Grâce à des interactions qui organisent la dynamique de l’actine et la phosphorégulation, la neurabine‑II contribue au remodelage des épines dendritiques, à la croissance des neurites et à la modulation de l’excitabilité neuronale ainsi que de la signalisation des récepteurs. Ces fonctions rattachent PPP1R9B à des voies contrôlant la plasticité synaptique, l’architecture du cytosquelette et la transduction du signal au niveau de la densité postsynaptique. Un ciblage dérégulé de PP1 et une organisation synaptique dépendante de l’actine sont pertinents pour des domaines de recherche en neurobiologie, notamment ceux portant sur des phénotypes cognitifs et neuropsychiatriques, où des altérations de la connectivité neuronale et de la signalisation constituent des thèmes mécanistiques récurrents.

Neurabin-II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PPP1R9B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Neurabin-II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PPP1R9B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PPP1R9B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Neurabin-II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PPP1R9B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Neurabin-II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Neurabin-II dans les cellules tumorales présentant une expression de PPP1R9B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.