Plasmide Double Nickase (h) Neu1: sc-401488-NIC

NEU1 code la neuraminidase 1 (Neu1), une sialidase lysosomale qui enlève les acides sialiques terminaux des glycoprotéines et des glycolipides, contribuant au renouvellement des glycoconjugués et au fonctionnement du lysosome. Neu1 agit au sein d’un complexe multienzymatique avec la protéine protectrice/cathépsine A et la β-galactosidase, couplant la désialylation à des processus cataboliques lysosomaux plus larges et au remodelage des glycannes. En régulant l’état de sialylation à la surface cellulaire, NEU1 influence le trafic des récepteurs, l’endocytose et des événements de signalisation liés à l’immunité qui dépendent de la maturation des glycoprotéines. Une perturbation de l’activité de NEU1 est associée à des pathologies de surcharge lysosomale ainsi qu’à des phénotypes inflammatoires et métaboliques altérés, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’homéostasie dépendante du lysosome.

Neu1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NEU1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NEU1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NEU1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NEU1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.