Plásmido CRISPR de Activación (h) netrin-1: sc-401871-ACT

El gen humano **NTN1** codifica **netrina-1**, una señal guía secretada relacionada con las lamininas que dirige la orientación de los axones y la migración neuronal, al tiempo que influye en el comportamiento de células epiteliales y endoteliales. La netrina-1 se une a receptores como **DCC** y miembros de la familia **UNC5** para coordinar la dinámica del citoesqueleto, la adhesión y las señales de supervivencia, con efectos posteriores sobre procesos como el crecimiento de neuritas, la función de barrera y la remodelación angiogénica. Más allá del desarrollo, la actividad de **NTN1** se estudia en contextos de inflamación y remodelación tisular, donde los cambios en la expresión de netrina-1 pueden modificar el tráfico de leucocitos y las respuestas vasculares. La señalización desregulada de **NTN1** se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con alteraciones en la biología del microambiente tumoral, lo que lo convierte en un nodo útil para el análisis de vías en sistemas celulares diversos.

netrin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NTN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

netrin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NTN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NTN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de netrin-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NTN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de netrin-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía netrin-1 en células tumorales con expresión de NTN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.