Plasmide CRISPR/Cas9 KO Net (m): sc-420157

Présentation

Elk3 code le facteur de transcription Net, membre de la famille ETS, un régulateur dépendant du contexte qui intègre la signalisation MAPK/ERK aux complexes du serum response factor (SRF) afin de moduler les programmes de gènes à réponse immédiate. Net se fixe sur des motifs ETS au niveau des promoteurs et des enhancers, et peut agir comme répresseur ou activateur transcriptionnel selon son état de phosphorylation et la disponibilité de cofacteurs, orientant ainsi des transitions d’état cellulaire liées à la prolifération, la migration et la différenciation. Dans les modèles murins, l’activité d’Elk3/Net est fréquemment étudiée en biologie vasculaire et stromale, où les circuits ETS–SRF influencent l’expression de gènes angiogéniques et le remodelage tissulaire. La dérégulation des réseaux transcriptionnels ETS est impliquée dans la signalisation oncogénique, les phénotypes invasifs et des réponses vasculaires aberrantes, faisant d’Elk3 un nœud utile pour l’étude mécanistique des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Net (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Elk3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Elk3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Elk3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Net.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Elk3 pour l'étude de la signalisation de Net, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Elk3 essentiels à la fonction de Net
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Elk3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Net plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Net plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Elk3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Net plasmide HDR (m) et le Net (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Elk3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Elk3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.