Plasmide Double Nickase (h) NET-4: sc-404621-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NET-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NET-4 Double Nickase (h) et le plasmide NET-4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TSPAN5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NET-4 | sc-404621-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NET-4 | sc-404621-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TSPAN5 code la tétraspanine‑5 (NET‑4), une protéine membranaire à quatre passages transmembranaires qui organise des microdomaines enrichis en tétraspanines afin de coordonner l’agrégation des récepteurs, la communication cellule‑cellule et le trafic membranaire. NET‑4 a été impliquée dans la régulation de l’adhérence et de la migration cellulaires via ses interactions avec des protéines partenaires à la membrane plasmique, influençant des processus de signalisation liés au remodelage du cytosquelette et au transport vésiculaire. Dans les tissus humains, l’expression de TSPAN5 a été associée au développement neuronal et à l’organisation synaptique, ce qui concorde avec les rôles plus larges des tétraspanines dans la modulation de la dynamique des récepteurs et de la signalisation intercellulaire. Des réseaux de tétraspanines dérégulés, y compris des modifications des microdomaines liées à TSPAN5, sont étudiés dans le contexte de programmes de différenciation altérés et d’états de signalisation pertinents pour les maladies.
NET-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TSPAN5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TSPAN5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TSPAN5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TSPAN5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.