Plasmide Double Nickase (h) nestin: sc-400156-NIC

NES code la nestine, une protéine de filament intermédiaire de classe VI, particulièrement enrichie dans les cellules souches et progénitrices neurales, où elle contribue à l’organisation du cytosquelette lors de la prolifération, de la migration et de l’engagement de lignée. La nestine participe au remodelage du cytosquelette et à des programmes liés au cycle cellulaire, en intégrant des signaux issus de voies de signalisation du développement qui régulent l’état souche et la différenciation, notamment Notch, Wnt/β-caténine, ainsi que les voies MAPK et PI3K-AKT activées par des facteurs de croissance. Son expression est largement utilisée comme marqueur des progéniteurs neuroépithéliaux et des astroglies réactives, et elle est fréquemment induite lors du remodelage tissulaire et des réponses cellulaires au stress. Une expression dérégulée de NES est associée à des états de différenciation altérés et a été rapportée dans de nombreux cancers et contextes neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie des progéniteurs et des transitions d’état cellulaire associées aux maladies.

nestin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NES dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NES. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NES. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NES.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.