Particules Lentivirales d'Activation (h) nephrin: sc-400368-LAC

Le gène humain **NPHS1** code la néphrine, une protéine transmembranaire de la superfamille des immunoglobulines qui constitue un élément structural essentiel du diaphragme de fente situé entre les pédicelles des podocytes. La néphrine organise la barrière de filtration en établissant des interactions extracellulaires de type « fermeture éclair » et en coordonnant la signalisation intracellulaire via des protéines adaptatrices telles que **NCK**, reliant l’intégrité du diaphragme de fente au remodelage du cytosquelette d’actine. Les voies dépendantes de **NPHS1** contribuent à la polarité des podocytes, à la dynamique des jonctions cellule–cellule et aux réponses mécanoréactives qui maintiennent la permélectivité glomérulaire. La perturbation ou la dérégulation de la néphrine est fortement associée à des phénotypes de lésion podocytaire et à des mécanismes de néphropathie protéinurique, faisant de **NPHS1** une cible majeure pour l’étude de la biologie de la barrière glomérulaire.

Les particules d'activation lentivirales nephrin (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NPHS1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales nephrin (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NPHS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de nephrin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NPHS1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.