Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO nephrin (h): sc-400368
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- nephrin Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique nephrin, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: nephrin Antibody (G-8): sc-376522
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO nephrin (h) | sc-400368 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
NPHS1 code la néphrine, une protéine transmembranaire de la superfamille des immunoglobulines, essentielle à l’architecture et aux fonctions de signalisation du diaphragme de fente des podocytes dans le glomérule rénal. La néphrine participe à l’organisation des jonctions cellule–cellule et à la régulation du cytosquelette d’actine via des interactions avec des protéines adaptatrices et des voies en aval dépendantes de la phosphorylation, contribuant ainsi au maintien de l’intégrité de la barrière de filtration. L’altération de NPHS1 compromet la structure du diaphragme de fente, modifie l’adhésion des podocytes et les signaux de survie, et est associée à des phénotypes rénaux protéinuriques, notamment le syndrome néphrotique congénital. NPHS1 constitue donc une cible clé pour étudier la biologie des podocytes, la dynamique de la barrière de filtration et les mécanismes de signalisation jonctionnelle.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO nephrin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NPHS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NPHS1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NPHS1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine nephrin.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NPHS1 pour l'étude de la signalisation de nephrin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de NPHS1 essentiels à la fonction de nephrin
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NPHS1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le nephrin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le nephrin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NPHS1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le nephrin plasmide HDR (h) et le nephrin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NPHS1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NPHS1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.