Plasmide CRISPR/Cas9 KO NEPH3 (h): sc-406190

Présentation

KIRREL2 code pour NEPH3, une molécule d’adhérence de la superfamille des immunoglobulines enrichie au niveau de jonctions cellule–cellule spécialisées, où elle soutient la formation et le maintien de structures de type diaphragme de fente ainsi que l’organisation de la barrière épithéliale. NEPH3 participe à une signalisation dépendante du contact et au remodelage du cytosquelette via des interactions avec des protéines d’échafaudage qui coordonnent la dynamique de l’actine et la stabilité des complexes jonctionnels. Dans des contextes pertinents pour le rein, les complexes associés à NEPH3 sont liés à l’architecture des podocytes, à l’intégrité de la barrière de filtration et aux réponses cellulaires au stress mécanique ou inflammatoire. La dérégulation des réseaux d’adhérence de la famille NEPH a été associée à des pathologies glomérulaires et à une différenciation épithéliale altérée, faisant de KIRREL2 une cible utile pour étudier la signalisation jonctionnelle et l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NEPH3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KIRREL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KIRREL2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KIRREL2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NEPH3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KIRREL2 pour l'étude de la signalisation de NEPH3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KIRREL2 essentiels à la fonction de NEPH3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KIRREL2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NEPH3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NEPH3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KIRREL2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NEPH3 plasmide HDR (h) et le NEPH3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KIRREL2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KIRREL2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.