NELF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-437310

Übersicht

Nsmf kodiert NELF (nasal embryonic LHRH factor), ein mit Leitprozessen assoziiertes Protein, das während der Entwicklung an neuronaler Migration und Axonwegfindung beteiligt ist. In der Maus wird NELF mit Prozessen in Verbindung gebracht, die das Neuritenauswachsen, die Entwicklung des olfaktorischen/vomeronasalen Systems und die Etablierung hypothalamischer neuroendokriner Schaltkreise koordinieren. Eine veränderte NSMF/NELF-Funktion wurde mit kongenitalem hypogonadotropem Hypogonadismus und Kallmann-Syndrom-assoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was die Rolle in der Entwicklung von GnRH-Neuronen und der Regulation der Fortpflanzungsachse widerspiegelt. Diese Eigenschaften machen Nsmf zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Entwicklungsneurobiologie, der neuroendokrinen Signalübertragung und von Genotyp-Phänotyp-Beziehungen in Modellen der neuronalen Differenzierung.

Das NELF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nsmf-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nsmf-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nsmf nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NELF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nsmf-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NELF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nsmf-Exone abzielen, die für die NELF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nsmf-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NELF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NELF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nsmf-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NELF HDR-Plasmid (m) und NELF HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nsmf-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nsmf-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.