NELF-B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405667

Descripción general

NELFB codifica NELF-B, una subunidad central del complejo del factor de elongación negativo (NELF), que coopera con DSIF para regular la pausa de la ARN polimerasa II en la región proximal al promotor y coordinar la elongación productiva de la transcripción. A través de este punto de control, NELF-B influye en programas de expresión génica rápida y sensibles a estímulos, en el procesamiento cotranscripcional del ARN y en el control de la cinética transcripcional vinculado a la cromatina. La pausa dependiente de NELF-B se integra con vías de señalización y respuesta al estrés que ajustan finamente la salida transcripcional y las transiciones de estado celular. La desregulación del control de la elongación y de las redes asociadas a la pausa se ha implicado en programas transcripcionales oncogénicos y en otras enfermedades caracterizadas por una regulación génica alterada, lo que convierte a NELFB en un nodo útil para estudios mecanísticos del control transcripcional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NELF-B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NELFB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NELFB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NELFB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NELF-B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NELFB para la investigación de la señalización de NELF-B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NELFB críticos para la función de NELF-B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NELFB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NELF-B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NELF-B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NELFB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NELF-B (h) y el plásmido HDR NELF-B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NELFB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NELFB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.