Plásmido CRISPR de Activación (h) Nek1: sc-403501-ACT

NEK1 codifica la quinasa 1 relacionada con NIMA (Nek1), una quinasa de serina/treonina implicada en el control del ciclo celular, la biología del centrosoma y los cilios, y la coordinación de la respuesta al daño en el ADN. Nek1 se ha relacionado con procesos de señalización que regulan la dinámica de los microtúbulos, la señalización de puntos de control y la estabilidad genómica mediante el control dependiente de fosforilación de sustratos mitóticos clave y de sustratos asociados a la reparación. En células humanas, la alteración de la actividad de NEK1 se asocia con defectos en la ciliogénesis y con respuestas deficientes al estrés genotóxico, lo que vincula a esta quinasa con vías que determinan la homeostasis celular. Estudios genéticos y funcionales también han implicado a NEK1 en mecanismos relevantes para enfermedades, incluidas la neurodegeneración y fenotipos de inestabilidad genómica relacionados con el cáncer.

Nek1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NEK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nek1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NEK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NEK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nek1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NEK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nek1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nek1 en células tumorales con expresión de NEK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.