Plasmide Double Nickase (h) NEIL1: sc-403778-NIC

NEIL1 code l’endonucléase VIII‑like 1, une ADN glycosylase/lyase AP qui initie la réparation par excision de base en reconnaissant et en excisant des bases oxydées telles que les formamidopyrimidines et le glycol de thymine. NEIL1 agit dans le génome nucléaire et des rôles ont été rapportés au niveau des fourches de réplication, en soutenant la stabilité du génome durant la phase S et en coordonnant la réparation avec la réplication de l’ADN et la dynamique de la chromatine. Par ses interactions au sein de la BER et avec la synthèse de réparation en aval, NEIL1 contribue à limiter la mutagénèse et le stress réplicatif pouvant résulter des espèces réactives de l’oxygène et des dommages endogènes de l’ADN. Des altérations de l’activité ou de l’expression de NEIL1 ont été associées, dans des contextes de recherche, à des phénotypes pertinents pour la carcinogenèse, la neurodégénérescence et des dysfonctionnements métaboliques, soulignant l’importance de la prise en charge des dommages oxydatifs de l’ADN dans la biologie des maladies humaines.

NEIL1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NEIL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NEIL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NEIL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NEIL1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.