Plasmide CRISPR/Cas9 KO NEIL1 (h): sc-403778

Présentation

NEIL1 (endonuclease VIII-like 1) est une ADN glycosylase/lyase AP qui initie la réparation par excision de base (BER) en reconnaissant et en excisant des lésions oxydées de l’ADN, notamment des pyrimidines endommagées, et en traitant les sites abasiques afin de favoriser l’incision du brin. Elle agit dans les voies de réponse au stress oxydant et de maintien du génome, en coordination avec les enzymes de la BER en aval, pour restaurer l’intégrité de l’ADN lors de la réplication et de la transcription. L’activité de NEIL1 influence l’accumulation de mutations et la stabilité chromosomique, et son dérèglement est associé à des mécanismes impliqués dans la cancérogenèse ainsi que dans d’autres troubles liés aux dommages oxydatifs de l’ADN. En tant que facteur de réparation nucléaire, NEIL1 est fréquemment étudiée dans le contexte de la réparation associée à la réplication, de la stabilité des génomes mitochondrial et nucléaire, et des réponses cellulaires aux espèces réactives de l’oxygène.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NEIL1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NEIL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NEIL1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NEIL1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NEIL1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NEIL1 pour l'étude de la signalisation de NEIL1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NEIL1 essentiels à la fonction de NEIL1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NEIL1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NEIL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NEIL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NEIL1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NEIL1 plasmide HDR (h) et le NEIL1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NEIL1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NEIL1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.