Plasmide Double Nickase (h) NEDD8: sc-417924-NIC

NEDD8 code un modificateur de type ubiquitine qui est conjugué de façon covalente à des substrats dans la voie de la neddylation, en particulier aux protéines de la famille des cullines, qui servent d’échafaudage aux ligases E3 ubiquitine culline–RING (CRL). La conjugaison de NEDD8 régule le renouvellement des protéines, la progression du cycle cellulaire, la réplication et la réparation de l’ADN, ainsi que la signalisation du stress, en modulant l’activité des CRL et, en aval, la protéostase dépendante de l’ubiquitine. La perturbation de la neddylation modifie le contrôle des points de contrôle, la stabilité du génome et les programmes transcriptionnels, reliant la dérégulation de la voie NEDD8 à des phénotypes prolifératifs et à un remodelage des réseaux de signalisation observés dans de nombreux contextes pathologiques. En tant que nœud central des modifications post-traductionnelles de type ubiquitine, NEDD8 est largement étudié en protéomique, en cartographie des voies et dans des criblages de génomique fonctionnelle.

NEDD8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NEDD8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NEDD8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NEDD8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NEDD8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.