NEDD8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417924-ACT

NEDD8は、ユビキチン様タンパク質NEDD8をコードしており、カルリン（cullin）足場タンパク質に共有結合してカルリン–RING型E3ユビキチンリガーゼ（CRL）を活性化する「ネディレーション（neddylation）経路」における重要な修飾因子です。CRL依存的なユビキチン化の制御を通じて、NEDD8はプロテオスタシス、細胞周期の進行、DNA複製および修復、ならびにストレス応答シグナル伝達に影響を与えます。NEDD8依存的なCRL活性は、多くの短寿命調節因子の分解回転を規定し、ネディレーションをチェックポイント制御や転写プログラムと結び付けています。ネディレーションの異常やCRL機能の変化は、多様な疾患モデルで観察される増殖性およびプロテオトキシックな表現型、ゲノム不安定性、経路の再編成と関連して、しばしば研究対象となっています。

NEDD8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NEDD8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NEDD8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NEDD8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNEDD8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NEDD8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNEDD8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNEDD8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNEDD8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNEDD8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。