Plasmide Double Nickase (m) NDUFV1: sc-421845-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) NDUFV1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NDUFV1 Double Nickase (m) et le plasmide NDUFV1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ndufv1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) NDUFV1 | sc-421845-NIC | 20 µg | $410.00 |
Ndufv1 code pour NDUFV1, une sous-unité flavoprotéique du complexe I de la chaîne respiratoire mitochondriale (NADH:ubiquinone oxydoréductase) qui participe au transfert d’électrons depuis le NADH via le FMN et des centres fer-soufre jusqu’à l’ubiquinone. Cette activité soutient la phosphorylation oxydative, le maintien du potentiel de membrane mitochondrial et l’homéostasie rédox cellulaire, avec des effets en aval sur la production d’ATP et la gestion des espèces réactives de l’oxygène. La fonction de NDUFV1 s’articule aussi avec les voies de contrôle qualité mitochondriales et de réponse au stress, qui influencent le remodelage métabolique dans les tissus à forte demande énergétique. Les altérations de l’activité du complexe I et les dysfonctionnements associés à NDUFV1 sont pertinentes pour les études de bioénergétique mitochondriale, de neurobiologie et de phénotypes cardiométaboliques dans des modèles murins.
NDUFV1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ndufv1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ndufv1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ndufv1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ndufv1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.