Plasmide Double Nickase (h) NDUFS4: sc-405184-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NDUFS4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NDUFS4 Double Nickase (h) et le plasmide NDUFS4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NDUFS4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NDUFS4 Antibody (A-7): sc-514002
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NDUFS4 | sc-405184-NIC | 20 µg | $410.00 |
NDUFS4 code une sous-unité accessoire du complexe I de la chaîne respiratoire mitochondriale (NADH:ubiquinone oxydoréductase), qui soutient l’assemblage et la stabilité du complexe I au sein de la membrane interne mitochondriale. En permettant un transfert efficace des électrons du NADH vers l’ubiquinone, NDUFS4 contribue à la phosphorylation oxydative, au maintien du potentiel de membrane mitochondrial et à la régulation de l’équilibre rédox cellulaire. Une altération de la fonction de NDUFS4 est associée à une diminution de l’activité du complexe I, à une gestion modifiée des espèces réactives de l’oxygène et à un remodelage métabolique pouvant affecter les réseaux de signalisation bioénergétique. Des variants de NDUFS4 sont associés à des phénotypes de déficit du complexe I mitochondrial, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques portant sur la dysfonction mitochondriale et les réponses au stress.
NDUFS4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NDUFS4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NDUFS4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NDUFS4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NDUFS4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.