Particules Lentivirales d'Activation (h) NDUFS1: sc-416401-LAC

NDUFS1 code une sous-unité centrale essentielle du complexe I mitochondrial (NADH:ubiquinone oxydoréductase), qui soutient la phosphorylation oxydative en transférant des électrons du NADH vers l’ubiquinone et en contribuant au pompage des protons à travers la membrane mitochondriale interne. Par son rôle dans la chaîne de transport d’électrons, NDUFS1 influence la production cellulaire d’ATP, le maintien du potentiel de membrane mitochondrial et l’homéostasie redox, avec des effets en aval sur la signalisation par les espèces réactives de l’oxygène et l’adaptation métabolique. Une perturbation de la fonction du complexe I est associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale qui touchent des tissus à forte demande énergétique et peut moduler la susceptibilité au stress oxydatif. En tant que gène mitochondrial codé par le noyau, NDUFS1 est largement étudié en bioénergétique, dans le contrôle qualité mitochondrial et dans des modèles pathologiques pertinents d’altération de la chaîne respiratoire.

Les particules d'activation lentivirales NDUFS1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NDUFS1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NDUFS1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NDUFS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NDUFS1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NDUFS1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.